Без кейворду

В останні роки практика торгівлі розмноженими в неволі фрагментами коралів призвела до одночасного перенесення видів-шкідників. Багато років тому перенесення видів-шкідників було помітним при поширенні неприємних анемон, Aiptasia spp. На сьогоднішній день все ще не існує простого методу повного викорінення цих швидко розмножуються анемон, як тільки вони потрапляють в акваріум, і тепер вони зустрічаються як небажані попутники з популяцій, створених в оптових, роздрібних і аматорських акваріумах по всьому світу. Ряд біологічних, ручних і хімічних засобів використовуються окремо або в комбінації в спробах контролювати ці анемони, як правило, безуспішно. Через кілька років подібні спалахи в акваріумах почали відбуватися з іншою шкідливою анемоною, попередньо визначеною як Anemonia majano. Інші шкідливі види, включаючи водорості, плоскі черви (наприклад, Convolutriloba sp.), ціанобактерії та гідроїди, також стають проблемою для багатьох акваріумістів через їх швидке поширення, цвітіння та складність контролю за розмноженням, на шкоду іншим бажаним видам в акваріумі. Однак багато з цих поширених видів зазвичай присутні в акваріумі, і їх перенесення може бути менш важливим при тимчасовому або хронічному збільшенні чисельності популяції.

Повідомлялося про випадки появи коралових хижаків та паразитів як “автостопників” на зібраних у дикій природі коралах та живому камінні протягом усього часу, поки існує торгівля рифовими акваріумами. Однак останніми роками спостерігається поява кількох видів шкідників, які важко викорінити і які легко і ненавмисно переносяться між акваріумами через все більш поширену практику продажу або торгівлі фрагментами та колоніями коралів, вирощених у неволі. Точно невідомо, коли відбулася перша інтродукція цих шкідників, або чи регулярно вони потрапляють в торгівлю через постійні колекції. Однією з найбільш поширених подій, яка стала основою багатьох місцевих акваріумних клубів, є “обмін уламками”, коли члени клубу, які часто налічують сотні, збираються разом і обмінюються коралами та іншою живністю. Занадто часто не докладається майже ніяких зусиль для ретельної перевірки або карантинування тварин, придбаних на цих заходах. Крім того, багато роздрібних магазинів почали купувати фрагменти вирощених в неволі коралів для перепродажу, а любителі почали продавати фрагменти коралів на eBay та інших веб-сайтах. Маючи стільки можливостей для швидкого поширення паразитів, хижаків і патогенних мікроорганізмів, не дивно, що ці види шкідників набули такого широкого розповсюдження, а деякі з них навіть вийшли на міжнародний рівень.

Акваріумна епізоотія паразитичних копепод (Tegastes acroporanus), специфічних для Acropora spp. стала глобальною проблемою. Хоча паразитуючі корали можуть існувати без очевидної шкоди протягом багатьох років, високі популяції цих копепод на деяких коралах викликають знебарвлення і можуть призвести до загибелі (Борнеман, 2004). Існують ефективні методи лікування цього шкідника, хоча жоден з них не є комерційно доступним (Dorton 2004, Borneman 2004). Інші шкідники коралів, однак, є коралоїдними, їх важко викорінити і майже завжди призводять до повної загибелі колонії.

Звіти та поведінка

Серед найбільш помітних і нині широко розповсюджених шкідників, які спричиняють загибель коралів, є еолоїдні голі гілки, які полюють на види Montipora. Наскільки мені відомо, вони не описані і, хоча є аматорські повідомлення про те, що вони полюють на поритів та анакропор, можуть залишатися деякі таксономічні питання щодо правильної ідентифікації інших родів коралів, оскільки деякі види цих різних родів можуть бути схожими один на одного. Можливо, тут також задіяно більше одного виду еолідних голих гілок. На численних веб-сайтах також зазначалося, що ці голожаберні зберігають нематоцисти своєї здобичі у своїх цератах різних особин, хоча, наскільки мені відомо, це не було підтверджено, і уважне вивчення, здається, вказує на те, що замість цього вони зберігають зооксантелли від своєї здобичі (рис. 1). Голяки гермафродитні і виробляють скупчення з 3-20 або більше яєць, які відкладаються на межі між живою тканиною та оголеним скелетом або поблизу неї (рис. 2). Яйця утворюються не у вигляді спіралей або стрічок, а скоріше у вигляді пучків, часто відокремлених або навіть всередині коралітів (рис. 3, 4). Час розвитку та вилуплення не визначено, але вони є прямим розвитком і не мають пелагічного личинкового періоду. Молодь вилуплюється з яєць у віці менше 0,25 мм і швидко росте до максимального розміру близько 3 мм. Їх розмір в середньому становить 1-2 мм, хоча деякі види молюсків виростають більшими, ніж інші, і вони демонструють видові переваги в харчуванні, хоча всі молюски є потенційними об’єктами здобичі. Час від вилуплення до репродуктивної зрілості невідомий, як і середня тривалість їхнього життя або тривалість часу, протягом якого вони можуть вижити без господаря. Природні хижаки невідомі, хоча окремі повідомлення стверджують, що їх можуть контролювати різні риби, креветки та трубочники. Однак, наскільки мені відомо, жоден з них не виявився послідовно ефективним хижаком, і більшість хижаків лише контролюють популяції жертв, а не знищують їх. Насправді, про ці популяції відомо мало інформації, хоча протягом багатьох років відбувалося багато дискусій в Інтернеті і були спроби написати кілька коротких статей (Whitby 2007).

Хижацтво господаря Montipora носить кооперативний характер. У великій кількості голі гілки групуються разом і споживають корал в лінію, залишаючи смугоподібний візерунок (рис. 5). Поодинокі або декілька голих гілок на коралі, як правило, споживають тканину корала, залишаючи круглі або напівкруглі плями (рис. 6,7). Еоліди досить малі, щоб легко ховатися і відкладати яйця в природні тріщини і складки скелета корала. Однак така крипта не є обов’язковою, і активне хижацтво може відбуватися і відбувається на відкритих поверхнях коралів, що не мають такого захисту мікросередовища існування. Таємнича поведінка прикметна тим, що вона створює труднощі в спостереженні та викоріненні цих коралових хижаків. Лікування, яке спробували любителі, включає прісноводні занурення, йод Люголя, Tetra Marin Oomed та різні комерційні коралові занурення. Було виявлено, що всі вони мають або обмежений вплив на дорослих особин чи їхні яйця, або є стресовими для коралів. Ручне видалення або підривання за допомогою сильного потоку морської води або шприца ефективне для видимих дорослих особин, але займає багато часу, неефективне проти яєць і майже завжди пропускає дорослих особин, захованих у поглибленнях скелета.

Два препарати виявилися корисними в пілотних випробуваннях акваріумістів, але не схвалені для використання з коралами. Перший, левамізол, є антигельмінтною та антибіотичною сполукою, яка широко використовується проти багатьох внутрішніх гельмінтів у ветеринарній медицині. Він діє як холінергічний агоніст, що призводить до нервово-м’язового паралічу, легко розчиняється у воді і має загалом низьку токсичність. Він викликає параліч голих гілок і дозволяє їм легше змиватися з поверхні коралів. Однак не було встановлено рівня дозування, який би вбивав голих гілок, але не вбивав корали. Крім того, левамізол, схоже, не має жодного впливу на яйця голожаберників. Другим препаратом, який використовувався у випадкових випробуваннях, є празиквантел, препарат, що відпускається за рецептом, який, як вважається, впливає на кальцієві канали, а також викликає параліч і, можливо, порушує яйцекладку (відкладання яєць) у чутливих до нього паразитів. Зазвичай використовується як антигельмінтний засіб проти плоских глистів. Він має ефекти, подібні до левамізолу, на голих стьожкових червів, і на сьогоднішній день є мало даних, що підтверджують його ефективність.

У вересні 2005 року, під час екстреної підготовки до урагану Рита, я прийняв численні корали від членів місцевого клубу, які евакуювалися з Х’юстона. Як дуже незвичайний виняток, враховуючи шторм, я не помістив корали членів клубу в карантин перед тим, як помістити їх у свої системи вирощування. В результаті у мене був спалах тегастидних копепод на моїх видах Acropora, і еолоїдних голих гілок на моїх видах Montipora. Я легко знищив тегастид, використовуючи оксим мілбеміцину (Interceptor™, Novartis). Однак мої спроби викорінити голих гілок зайняли майже рік і включали всі перераховані вище методи, за винятком занурення в прісну воду. Зрештою, тільки високоагресивна фрагментація з карантином і ретельним спостереженням врятувала генотипи, які я мав в культурі, а голі бранші з’їли кілька сотень фрагментів щонайменше восьми різних видів Montipora . Після повторного введення в культурну систему різні фрагменти швидко росли і не виявляли жодних ознак голих гілок протягом п’яти місяців. Однак у травні 2007 року я помітив кілька фрагментів з білими плямами оголеного скелета і виявив, що вони знову обросли хижими голими щупальцями. На деяких фрагментах були присутні десятки голодранців, а на інших не було жодного. Я почав шукати альтернативні рішення, оскільки виявилося, що голоногі могли виживати протягом тривалого часу з невеликою кількістю здобичі або взагалі без неї.

Молюскоцид – це сполука, яка вбиває молюсків, до яких відносяться голожаберні молюски без черепашки. Більшість знайдених мною агентів, які використовуються в наземних дослідженнях і практиці, будуть токсичними або для акваріума, або для коралів. Найчастіше використовуються сполуки міді та алюмінію. Однак спочатку я виявив, що перманганат калію використовується для знищення дорослих особин та яєць прісноводних равликів в акваріумах (Ендрюс 1988), і що часник є репелентом та молюскоподібним агентом для наземних равликів (Сінгх та Сінгх 2003), ефективним проти кліщів та нематод (Мур та Ленглет 2004), а також має протигрибкові, противірусні та антимікробні властивості (Сінгх та ін. 1998; Shadkchan, et al 2004, і див. додаткові посилання). Я вагався і скептично ставився до твердження про часник, оскільки часник став анекдотичною панацеєю від багатьох морських акваріумних хвороб, маючи мало наукових доказів його ефективності (Про 2005). Я використовував перманганат калію в рифових акваріумах без видимої шкоди багато років тому у вигляді органічного окислювача під назвою Poly-Ox (Kent Marine), який на той час рекламувався як безпечний для рифів, якщо використовувати його за призначенням. Продукт все ще виробляється.

Оскільки цей новий спалах еолідів був невеликим, і оскільки кількість фрагментів Montipora в моїх культуральних системах була різко зменшена, я не зміг виконати ступінь реплікацій і графіки дозування, які були б ідеальними. Однак успіх деяких методів дав мені достатньо впевненості, щоб повірити, що ці методи лікування повинні використовуватися іншими, і, сподіваюся, в контрольованій формі, щоб можна було отримати відповідні та ефективні реакції на дозу.

Я неохоче і скептично взяв участь у ряді випробувань з використанням свіжого часнику і часникових продуктів. Нижче наведені описи цих випробувань.

Випробування 1 – вплив свіжого часнику на голі гілки

Я розчавив один зубчик свіжого часнику за допомогою часникового преса і додав його до 500 мл акваріумної води в неглибокому пластиковому посуді. Я видалив 25 голих гілок з однієї колонії Montipora (MS1) і помістив їх в ємність з часником і водою. Ще 25 голих гілок я помістив в іншу неглибоку пластикову тарілку, в якій було лише 500 мл акваріумної води. На наступній часовій шкалі описані ефекти, які можна побачити під препарувальним мікроскопом Nikon в системі, обробленій часником:

• 22 голі гілки піднімають голови в товщі води

• 21 гола гілка робить повільні зморшкуваті, скручувальні рухи; сім голих гілок скручуються

• 23 голі гілки нерухомі; дві голі гілки нерухомі, але повільно крутяться на місці

• всі голі гілки нерухомі; вісім все ще прикріплені задньою ногою до субстрату, 17 вільно дрейфують у воді
• вилучено три нерухомі голі гілки та поміщено у свіжу морську воду об’ємом 500 мл

• всі голі гілки нерухомі та дрейфують
• одна з трьох вилучених голих гілок (60 хвилин) опустила ногу вниз і скручується

• всі голі гілки нерухомі та дрейфують
• два знятих нудьги (60 хвилин) прикріплені, повільно рухаються
• знято ще три лікувальні нудибранші та поміщено у свіжу морську воду об’ємом 500 мл

• деякі нудибранхи втрачають церату, всі залишаються нерухомими і виглядають мертвими

• на всіх голих гілках вицвіла церата, вони нерухомі, виглядають мертвими
• всі три видалені (60 хвилин) голі гілки нерухомі; одна все ще прикріплена до задньої частини стопи
• всі три видалені (150 хвилин) залишаються нерухомими та дрейфують
• видалено ще три лікувальні голодранці та поміщено у свіжу морську воду об’ємом 500 мл

• всі голі гілки виглядають мертвими, церата відшарувалася та потьмяніла
• дві з трьох голих гілок (60 хвилин) прикріплені до задньої частини стопи, але не рухаються
• всі три (150 хвилин) виглядають мертвими
• всі три (210 хвилин) виглядають мертвими
• видалено ще три лікувальні голодранці та поміщено у свіжу морську воду об’ємом 500 мл

• всі водорості відмерли і розкладаються
• дві голі гілки мертві та розкладаються; одна показує нервову реакцію на зондування, але не рухається (зрештою, загинула)
• всі водорості відмерли і розкладаються
• всі контрольні особини живі і повільно повзають по дну пластикової посудини

Дослід 2 – вплив свіжого часнику на корал та голих водоростей

An apparently healthy fragment of the same genet of MS1 ( Montipora species #1) with a solid mass of nudibranchs (est. >50) на коралі був поміщений у 500 мл акваріумної води в неглибокому пластиковому посуді з одним роздавленим зубчиком часнику, як зазначено вище. На наступній часовій шкалі описані ефекти, які можна побачити під препарувальним мікроскопом Nikon:

• значний рух голих гілок і підняття головок у товщу води
• корал виглядає здоровим і неушкодженим

• більшість голих гілок скручуються і зморщуються; п’ять відпали від корала і лежать на дні посудини (скручуються і зморщуються)
• корал виглядає здоровим і неушкодженим

• багато голих гілок нерухомі, багато скручуються і звиваються, жодна не повзе
• корал виглядає здоровим і неушкодженим

• більшість голих гілок нерухомі, дрейфують і не прикріплені; лише дві взагалі рухаються (скручуються і зморщуються)
• корал виглядає здоровим і неушкодженим

• всі голі гілки нерухомі і не рухаються навіть при промацуванні
• корал виглядає здоровим і неушкодженим

• голі гілки видаляються струмом води з маленької пластикової піпетки
• частина тканин корала видаляється легким струменем води з піпетки
• корали замінені в карантинний акваріум (з тим же об’ємом води, що і у вихідних колоніях)
• інші мертві черевоногі молюски, знайдені на дні лікувального посуду (дрібні Cerith sp.)

• кораловий слиз, що стікає

• корал все ще виділяє слиз; деякі тканини виглядають некротизованими або желеподібними

• попередні ділянки некротизованої тканини були втрачені, а прилеглі тканини виглядають як коричнево-желеподібна інфекція

• корал виймають з акваріума і промивають у струмені морської води за межами акваріума

• тканина коралів продовжує ставати гелеподібною / некротизованою

Дослід 3 – вплив комерційного часникового препарату на корали та голі гілки

Здоровий на вигляд фрагмент MS1 з голими гілками був поміщений у неглибоку пластикову посудину з 500 мл акваріумної води. У воду додали десять крапель Kyolic™ (Wakanuga of America Co., Ltd., Mission Viejo, California), комерційного витриманого екстракту часнику, і перемішали. На наступній часовій шкалі описані ефекти, що спостерігаються під препарувальним мікроскопом Nikon:

• голі гілки рухаються нормально
• корал виглядає здоровим і неушкодженим

• голі гілки рухаються нормально
• корал виглядає здоровим і неушкодженим

• голі гілки рухаються нормально
• корал виглядає здоровим і неушкодженим
• додали ще 10 крапель Kyolic™

• голі гілки рухаються нормально
• корал виглядає здоровим і неушкодженим
• додали ще 10 крапель Kyolic™

• голі гілки рухаються нормально
• корал виглядає здоровим і неушкодженим
• додали ще 10 крапель Kyolic™

• голі гілки рухаються нормально
• корал виглядає здоровим і неушкодженим
• дослідження припинено

• корал живий і виглядає здоровим, але з голими гілками

Випробування 4 – вплив часникової олії в гелевій оболонці на голі пагони

Я видалив п’ять голих гілок з невеликого фрагмента іншого виду Montipora (MS2) і помістив їх у скляну культуральну посудину з акваріумною водою. Потім я проколов капсулу часникової олії (Nature’s Bounty, Inc., Bohemia, NY) вагою 1 г у вигляді софтгелю і вичавив її вміст у воду. Олія плавала на поверхні води. На наступній часовій шкалі описані ефекти, які можна побачити під препарувальним мікроскопом Nikon:

• голі гілки рухаються нормально

• голі гілки рухаються нормально
• одна гола гілка обережно піднята і проштовхнута через часникову олію на поверхні

• голі гілки рухаються нормально
• під впливом часникової олії гілочка згорнулася і стала нерухомою

• голі гілки рухаються нормально
• часникова олія, що потрапила на поверхню, нерухома, але реагує на зондування

• голі гілки рухаються нормально
• часникова олія, що потрапила на голі гілки, демонструє дещо підвищену реактивність на зондування

• голі гілки рухаються нормально
• часникова олія оголеною гілкою прикріпилася до тарілки і нормально рухається
• додано два кристали ( <0.01g) potassium permanganate

• голі гілки здаються закріпленими на задньому кінці стопи і не можуть рухатися; передній кінець скручується вперед-назад, а всі голі гілки скручуються

• всі голі кінцівки повністю не реагують і вважаються мертвими

• всі голі кінцівки повністю дезінтегровані

Дослід 5 – вплив комерційного часникового продукту, що містить активний аліцин

З колонії МС1 і невеликої колонії МС2 з голими гілочками видалили чотири голі гілочки, а яйця помістили в один літр води з подрібненою таблеткою препарату Пур-Гар (Naturol, Inc.). Також було додано фрагмент MS1 без голих гілок для визначення впливу “Пур-Гару” на цей вид коралів. Цей продукт містить 6000 мкг аліцину в перерахунку з 14 600 мкг активного аліцину. Це один з небагатьох комерційно доступних перероблених часникових продуктів, який стверджує, що має активну аліцинову активність, і, очевидно, має її. На наступній часовій шкалі описані ефекти, які можна побачити під препарувальним мікроскопом Nikon:

• Оголені гілки негайно відповзають від місць відкладання яєць і країв тканин. Вони реагують не так, як на свіжий часник, але їхня реакція, схожа на втечу, на отруйний агент очевидна.

• Всі голі гілки все ще рухаються нормально, але віддаляються від коралової тканини або пересуваються по поверхні корала. Голі гілки, вилучені з MS1, скручуються, але залишаються дуже чутливими до зондування, хоча вони не повзають. Корали виглядають неушкодженими.

• Лише одна гола гілка все ще помітна на коралі MS2, і вона все ще повзає. Більшість інших нерухомі, а решта ледь реагують на зондування.

• Всі голі гілки нерухомі і виглядають мертвими; їх вилучили і помістили в 95% етанол для ідентифікації. Яйця все ще прикріплені до коралів і будуть спостерігатися. Реакція коралів при заміні у воду: вони не виділяють велику кількість слизу і, здається, не постраждали від лікування, на відміну від свіжого часнику.

Випробування 1 – вплив дози 50 мг/л на голі гілки протягом двох годин

Я розчинив 50 мг перманганату калію (Sigma, Inc.) в 1000 мл акваріумної води в неглибокому пластиковому посуді. Я видалив 25 голих гілок з однієї колонії Montipora (MS1) і помістив їх у ємність з розчином. Ще 25 голих гілок я помістив в інший неглибокий пластиковий посуд з 500 мл акваріумної води. На наступній часовій шкалі описані ефекти, які можна побачити під препарувальним мікроскопом Nikon:

• голі гілки негайно починають рухатися, ніби реагуючи на отруйну речовину

• голі гілки скручуються та скручуються, церата щільно притиснута до тіла, деякі піднімають голови вгору в товщі води

• голі гілки рухаються дуже повільно, сім відірвалися і плавають у воді, але реагують на зонд; вода в акваріумі набуває коричневого кольору
• три голих гіллястовусих вилучено та поміщено у 500 мл свіжої морської води

• голі гілки виглядають майже мертвими, деякі з них розпадаються; вода набуває коричневого кольору.
• видалені голі пагони виглядають нерухомими і не прикріпленими; не реагують на зонд

• повна дезінтеграція, і у воді не видно жодної голонасінної гілки
• видалені голі гілки мертві, а церати відокремлюються; немає подальшого розпаду, як у тих, що все ще знаходяться в очищеній воді

Випробування 2 – вплив дози 50 мг/л на корали та голі гілки протягом двох годин

An apparently healthy fragment of the same genet of MS1 with a solid mass of nudibranchs (est. >50) на корали та видимі скупчення яєць поміщали в 1000мл акваріумної води в неглибокому пластиковому посуді з 50мг перманганату калію (KMnO ₄ ), як зазначено вище. Наведена нижче хронологія описує ефекти, що спостерігаються під препарувальним мікроскопом Nikon:

• голі гілки негайно починають хаотично повзти від межі тканини, де вони харчувалися

• голі гілки скручуються та скручуються, церата щільно притиснута до тіла, деякі піднімають голови вгору в товщі води
• корал здається не зачепленим лікуванням

• голі гілки здебільшого нерухомі, деякі все ще повільно ходять, а деякі відокремилися і плавають у товщі води
• корал здається не зачепленим лікуванням
• вода дуже коричнева від органічного окислення

• жодна гола гілка не рухається; три злегка реагують на зонд, деякі розпадаються
• корал здається не зачепленим лікуванням
• вода повністю коричнева, важко розгледіти корали або дно контейнера

• на коралі не видно голих гілок або скупчень яєць
• корали мають коричневий колір, але на вигляд не постраждали від лікування
• корал поміщений в карантинну систему (з тим же об’ємом води, що і вихідні колонії)

• коралові поліпи збільшилися, а забарвлення коралів в нормі

Випробування 3 – вплив високої дози (200 мг/л) на корали та голі гілки

Множинні фрагменти чотирьох видів (три MS1, два MS2, два MS3 і по три M. digitata; зелена, фіолетова і рожева морфи) піддавалися впливу 200 мг KMnO ₄ розчиненого в 1000 мл акваріумної води. Деякі колонії мали голі гілки, присутні з яєчною масою; деякі не мали ні видимої яєчної маси, ні голих гілок. Колонії залишалися в розчині протягом двох годин, промивалися в морській воді і вилучалися. Всі голі палички і яєчні маси зникли, імовірно, розпалися. Очищена вода мала непрозорий фіолетово-коричневий колір, що свідчить про надлишок KMnO₄на кількість органічного матеріалу, що окислився за дві години. Корали виглядали мертвими, слиз не прощупувався, а поліпи виглядали дезінтегрованими. Вони мали лише голий скелет без будь-яких тканин, що покривали їх. Колонії коралів були поміщені в карантинну систему (з тим же об’ємом води, що і вихідні колонії). Через два дні чотири колонії M. digitata почали нарощувати поліпи. Через чотири дні дві колонії MS1, дві колонії MS2, дві колонії MS3 та п’ять колоній M. digitata продовжували розвивати свої поліпи і виглядали нормальними та здоровими, за винятком ділянок, позбавлених тканин, раніше спожитих голими гілками. Загальна смертність від лікування становила чотири фрагменти M. digitata та один фрагмент MS1. Ця лікувальна доза була дуже стресовою для колоній, але вказує на верхню межу концентрації та час для того, що було майже ЛД ₅₀ рівня (LD _31.50 ) для коралів, і забезпечила 100% загибель голих гілок та яєчної маси.

Випробування 4 – вплив дози 50 мг/мл на корали та голі гілки протягом 90-210 хвилин

Фрагменти тієї ж кількості та генів, що використовувалися у досліді 3, але всі, що містили еолоїдні голі гілки та яйцеві маси, були піддані впливу 50 мг KMnO ₄ розчиненого в 1000 мл акваріумної води протягом 1,5-3,5 годин. Після обробки на жодному коралі не було виявлено ні голих гілок, ні яєць. Корали після 3,5-годинної обробки виглядали сильно стресованими і виглядали дуже схожими на ті, що зазнали впливу дози 200 мг/л у досліді 2. Однак вони відновилися набагато швидше, і всі виглядали нормальними протягом 24 годин. Загибелі коралів не відбулося.

Дослід 5 – вплив мінімальної дози на решту коралів та голі гілки

Фрагменти тієї ж кількості та генів, що використовувалися у досліді 3, але всі, що містили еолоїдні голі гілки та яйцеві маси, були піддані впливу 50 мг KMnO ₄ розчиненого в 1000 мл акваріумної води протягом 1,5 годин. В жодному випадку не було виявлено голих гілок або яєць на жодному коралі після тривалості лікування. Корали виглядали нормально через 24 години.

Для боротьби з неморськими равликами доступні природні молюскоциди, включаючи насіння, екстракти та олії Azadirachta indica (нім), Cedrus deodara (кедр), Allium sativum (часник), Polianthes tuberosa (бульбоцибулина), Zingiber officinale (імбир), Lawsonia inermis (хна), Annona squamosa (заварне яблуко), Sapindus trifoliatus (мильний горіх), Acacia concinna (шикакай), Madhuca indica (маура, медове дерево), Phytolacca acinosa (покіс) або комбінації з іншими рослинними молюскоцидами, які дуже ефективні як проти дорослих равликів, так і проти їх розмноження. Вони були розглянуті в численних роботах (Singh and Singh 2003, 2004; Rao and Singh 2002; Sukamaran et al 2002). Багато з них, а також більшість неприродних і нових молюскоцидів (Schüder et al 2004), очевидно, не можуть бути використані проти коралоїдних равликів, оскільки вони містять мідь, інші метали або інші сполуки, які є високотоксичними для коралів та інших безхребетних. Інші містять сполуки, які, як показали різні дослідження водної екотоксичності, є шкідливими для водних організмів; хоча лише деякі з них, якщо такі взагалі були, були протестовані на коралах. Серед тих, що мають найнижчу токсичність, в цілому, є деякі біологічно активні сполуки природних продуктів.

Ефективність будь-якого біоцидного агента визначається кількістю видів-мішеней, які він знищує. Ідеальні біоцидні агенти вбивають або завдають шкоди тільки цільовим видам, а не нецільовим (хазяїну, бажаним) видам. Прикладом майже ідеального біоциду є використання різних препаратів від бліх (наприклад, Advantage™, Program™, Revolution™ тощо), які діють саме проти характеристик цільового виду, які відсутні у нецільових видів. Однак майже у всіх ситуаціях існують випадки, коли виникають побічні ефекти або незаплановані небажані ефекти, навіть якщо вони є мінімальними. В інших випадках, наприклад, при деяких видах раку, медикаментозна терапія базується на засобах, які вбивають всі клітини, але переважно вбивають клітини-мішені, а не клітини-немішені. У цих випадках шкода або смерть є очевидною можливістю навіть для нецільових видів, але користь від лікування переважає ризики відсутності лікування. Корали, по суті, абсолютно не вивчені у використанні будь-яких методів лікування будь-яких хвороб, шкідників, патогенних мікроорганізмів або паразитів. Навряд чи це зміниться, оскільки лікування коралових колоній в польових умовах є недоцільним. Тому знання та випробування різних методів лікування інфікованих, заражених або інших хворих коралів, швидше за все, будуть першими, якщо ті, хто утримує корали в неволі, де можна буде проводити випробування. Відкриття Interceptor™ (Novartis, Inc.) як терапевтичного засобу для паразитичних копепод було справді чудовим, оскільки він представляв собою майже ідеалізовану терапію коралів, спрямовану на паразита, а не на господаря (Dorton 2004). Однак при використанні в акваріумі вона впливає на багато інших некоралових видів, таких як ракоподібні та багатощетинкові черв’яки (Борнеман, 2004). В ідеалі, така терапія була б знайдена для всіх проблем з коралами, але малоймовірно, що терапія завжди буде ідеальною, і скоріше за все, вона буде знаходитися в континуумі змінної ефективності проти цільових та нецільових видів, як, наприклад, у прикладах, проілюстрованих вище.

Як правило, ідеальним варіантом є проведення ЛД ₅₀ або LC ₅₀ який визначає кількість (дозу/концентрацію) сполуки, необхідну для знищення 50% досліджуваної популяції. Це дає уявлення про токсичність сполуки по відношенню до даного виду. Ідеальний засіб має дуже високий показник LD ₅₀ або LC ₅₀ для хазяїна або нецільового виду (наприклад, корала) і низьку LD ₅₀ або LC ₅₀для мішені (наприклад, для голих гілок). Звичайно, будь-який вид суворої терапії, лікування та експериментів вимагає великої кількості тест-організмів, дозувань та варіацій. Це непрактично для акваріумістів, дуже дорого і займає багато часу. При роботі з такими ситуаціями, як спалахи копепод Tegastes, голих гілок Montipora або плоских черв’яків Acropora, щільність видів шкідників може бути досить високою, щоб отримати деякі кількісні дані, і акваріуміст або дослідник потенційно може створити достатньо фрагментів, щоб виконати певну кількісну роботу на коралах. Отримати достатню кількість заражених/заражених коралів для проведення випробувань на комбінації цільових/нецільових видів набагато складніше з точки зору необхідної кількості, і це не враховуючи контрольну групу. Тому будь-які запропоновані “методи лікування” хвороб коралів, швидше за все, включатимуть значні прогалини в даних. Аналогічно, ця робота має прогалини.

Коли я вперше зіткнувся зі спалахом голих гілок Монтіпори, моїм безпосереднім і логічним способом мислення було врятувати якомога більше коралів будь-якими можливими способами. Відсутність ретельно визначеного або відомого ефективного протоколу призвела до того, що я втратив практично всі корали, які я намагався врятувати. Коли стався другий менший спалах, у мене був обмежений матеріал, і втрата кількох фрагментів мене менше турбувала, тому я спробував включити певний ступінь контролю і продуманості в свої експериментальні випробування. Я ще не знайшов “ліки” або визначеного протоколу; однак я знайшов дві сполуки, які, здається, мають потенціал для використання для викорінення еолоїдних голих гілок, які полюють на Montipora. Щоб визначити, наскільки вони ефективні, знадобиться подальша робота інших, більше випробувань та довгостроковий моніторинг. Я б включив себе в цю групу для проведення додаткових випробувань, але я щиро сподіваюся, що усунув цих шкідників назавжди, і не буду намагатися розвивати свою поточну роботу через час і фінансування, необхідні для отримання більшої кількості голих гілок і вирощування більшої кількості фрагментів коралів. Можливо, будуть знайдені інші методи лікування, але сьогодні першочерговим питанням, здається, є пошук агента або комбінації агентів, які можуть вбити хімічно стійку яєчну масу. Я вважаю, що принаймні один з них, зокрема, перманганат калію, є ефективним.

Коли я прочитав, що часник виявився ефективним засобом для відлякування черевоногих молюсків і молюсків, я здригнувся (Singh and Singh 1999). Протягом багатьох років часник рекламувався як віртуальна панацея для морських декоративних рослин і доступний у продуктах харчування, добавках та комерційних засобах лікування, з невеликою кількістю достовірних доказів (Pro 2005). Я справді не хотів писати статтю про те, що часник є ліками від голих гілок Montipora, але, як виявляється, часник може бути ефективним. Свіжий часник, без сумніву, вбиває молодих і дорослих молі. Мені не вдалося точно визначити його вплив на яйцекладки, хоча на оброблених коралах до теперішнього часу жодна яйцекладка успішно не вилупилася. Частково причиною втрати яєчних мас є те, що свіжий часник також вбивав корали в тій дозі, яку я використовував. Я також лікував корали в застійній воді, і я втратив фрагменти Montipora до гелеподібного слизу, просто тримаючи їх у невеликих обсягах застійної акваріумної води протягом тривалості, яка використовувалася при лікуванні. Можливо, свіжий часник у циркулюючій морській воді вбив би голі гілки, але не корали. Можливо, кількість використаного свіжого часнику була занадто великою, і менша кількість, використана для більш тривалих періодів, або більша кількість для більш коротких періодів, була б більш ефективною. Це слід дослідити.

Аліцин є токсичною речовиною, яка, як відомо, діє як молюскоцид у часнику (Singh and Singh 1999). Аліцин не присутній до тих пір, поки фермент аліїназа не активує попередник, аліїн, і це відбувається, коли свіжий часник розрізають або подрібнюють. Коли я використовував витриманий часник або часникову олію, в яких аліцин не був присутній або доступний у воді, не було ніякої молюскової активності; корали і голі гілки пережили лікування. Комерційна таблетка з активним аліцином, Pur-Gar™, вбивала голих молюсків. Вона не викликала такої гострої початкової реакції у голих водоростей, як свіжий часник, як показало спостереження за їхньою поведінкою, але вона вбила голих водоростей за аналогічний проміжок часу і не вбила корали. Цей продукт після гідратації в морській воді також виглядав як зневоднений часник, а не розчинявся у воді або залишав осад. Еквівалентна доза, згідно з упаковкою, була еквівалентна ½ свіжого зубчика часнику. Я використовував цілий свіжий зубчик часнику у випробуваннях, які вбивали корали. Однак з цими порівняльними дозами існує кілька проблем. По-перше, не всі зубчики часнику однакового розміру. По-друге, не весь часник має однаковий рівень алліну або, отже, аліцину. По-третє, з небагатьох комерційних препаратів часникових добавок, які містять активний аліцин, виробники істотно різняться в своїх заявах про кількість аліцину в своїх продуктах і їх заявленої еквівалентності свіжому часнику. Останній коментар щодо ефективності часнику / аліцину є важливим щодо заяв інших продуктів для акваріумів, що містять часник. Більшість часникових добавок, добавок та продуктів не містять форму часнику, яка містить активний аліцин. Той факт, що продукт містить “часник”, не означає, що його активність пов’язана з активністю свіжого часнику (Berges, et al 2004), або, наприклад, препарату активного аліцину (Pur-Gar™, Allisure™ тощо).

Перманганат калію є сильним окислювачем, що має різноманітне застосування – від вибухових речовин до очищення води. Він може видаляти залізо, стерилізувати воду і дезінфікувати посіви, а також використовується для лікування паразитів і бактеріальних/грибкових інфекцій риб в аквакультурі. Він також використовується в розведених розчинах 10 мг/мл для видалення прісноводних равликів та яєць з прісноводних акваріумів, занурюючи рослини в розчин на 10 хвилин (Andrews, et al 1988). Він реагує з будь-якими органічними речовинами, включаючи водорості, бактерії, рибу, тверді частинки та розчинені органічні речовини, а також органічні донні відкладення (примітка: він досить ефективний для знищення водоростей на каменях (Todd, pers. comm.)). Це не той матеріал, який слід використовувати без обережності. Високоякісний перманганат калію доступний на комерційній основі в хімічних магазинах, басейнах і джерелах очищення води. Я використовував різні концентрації, більшість з яких були сильнішими, ніж ті, що використовуються для занурення прісноводних рослин, тому що я не бачив достатньо сильної початкової реакції від голих гілок, поміщених в концентрацію прісної води. Цілком можливо, що більш низькі дози є більш ефективними і безпечними у використанні, ніж більш сильні концентрації і більш тривалі терміни, які я використовував. Буде потрібно більше роботи, щоб визначити, чи будуть ефективними нижчі концентрації, але у мене не було достатньо фрагментів коралів або голих гілок, щоб розширити сферу випробувань.

Я використовував рівні дозування, які в 5-20 разів перевищували концентрацію занурення прісноводного равлика протягом тривалості в 9-21 разів довше. Лише при концентрації 200 мг/л протягом 120 хвилин деякі фрагменти коралів не відновилися. Фактично, п’ять з 16 фрагментів не вижили, встановивши “псевдо”-LD ₅₀ для Montipora в перманганаті калію. Це дуже хитка ЛД ₅₀ що складається всього з 16 фрагментів, не всі з яких навіть відносяться до одного і того ж виду Montipora. Тим не менш, це початок. Я попросив кількох інших акваріумістів підтвердити та/або розширити інформацію про виживання коралів та смертність голих гілок. Деякі з їхніх висновків повідомляються нижче.

На даний момент я виявив, що 50 мг/л протягом 90 хвилин – це рівень дози, який вбиває 100% шкідливих еолідних голих гілок та їх яєчну масу на чотирьох видах Montipora. Я вважаю, що це, ймовірно, дуже стресовий рівень дози, незважаючи на 100% виживання оброблених коралів (n=49). Я вважаю, що нижча концентрація або менша тривалість, ймовірно, все ще ефективна, але у мене немає достатньої кількості голих гілок або фрагментів коралів, щоб розширити сферу випробувань. Я закликаю інших допомогти надати більше даних про це лікування. Фотографії коралів безпосередньо після обробки та через 24 години наведені (рис. 8-10).

Місцевий акваріуміст виявив, що його колонії монтіпори були заселені шкідливими еолідними голими браншами (Todd, pers. comm.). Він також знайшов їх на стінках акваріума та на ящику для яєць у своїх фрагментарних акваріумах. Дивно, але він знайшов голожаберку біля пошкодження на акропорі і вважав, що вона поїдає два екземпляри цього роду. Ідентичність голих бражників ще не була підтверджена, але вони були візуально розподілені як типова популяція, що з’являється під час спалаху хвороби, на його колоніях Montipora. Він вирішив ізолювати колонії Montipora в одному резервуарі, а потім використати об’ємну апроксимацію дози 50 мг/л для 40-галонного акваріума з піском, коралами, рибами та іншими равликами. Під час лікування він видалив двох риб, які, як виявилося, перебували у скрутному становищі. Видалення риб призвело до того, що невелика кількість обробленої води була зміщена і потрапила в перелив і в інший резервуар під ним (випадкова обробка), що містив інші види риб і корали.

Навіть ця невелика кількість обробленої води мала дивовижні наслідки протягом приблизно 10 годин при низькій концентрації в аварійному резервуарі. Він повідомив, що вся риба швидко загинула. Ксенія та Антелія “розтанули” і швидко загинули. Pocillopora damicornis та Seriatopora hystrix розклали свої тканини. Як в лікувальному, так і в аварійному резервуарах загинули блукаючі поліхети, але вижили дрібні поліхети “пір’яного черв’яка”. Равлики Stomatella, в основному незахищений вид, вижили. Більші та менші види Trochus вижили, хоча більші види явно зазнали стресу, коли спочатку перебували в очисному резервуарі. Можливо, їхні оперкули ефективно утримували KMnO₄очищеної води. Саркофітон явно зазнав стресу, але синулярії, очевидно, не постраждали. Всі зоантиди, Aiptasia та Psammacora не постраждали. Турбінарія гостро відреагувала на першу експозицію, але потім повністю відновилася, ніби не була уражена. Всі шкідливі еолідові голі гілки розпалися, а всі яйцеві маси зникли.

Другий акваріуміст також використовував обробку перманганатом калію. Він також відзначив різну виживаність коралів при рівні дози 50 мг/л, але зі 100% смертністю голих гілок та яєць. Він зазначив, що деякі колонії, як видається, все ще мали яєчну масу, але вона швидко розпалася після того, як колонії були поміщені назад у карантинний резервуар. Він також виявив, що 30 хвилин виявилося достатньо, щоб викликати загибель голих гілок і яєчних мас. Він заявив, що це єдине випробуване ним лікування, яке діє на ікру, але також зазначив, що воно було стресовим для коралів. Ще раз повторюю, що хоча перманганат калію, здається, має потенціал, ідеальна концентрація та тривалість лікування вимагає більше випробувань, а індивідуальні відмінності між видами Montipora або їх загальний стан здоров’я можуть вплинути на остаточну дозу лікування.

Очевидно, що це не “безпечне для рифових акваріумів” лікування. Це, схоже, ефективний засіб для лікування Montipora, що поїдає еолоїдних голих водоростей, і, можливо, інших шкідливих голих водоростей. Щонайменше п’ять видів Монтіпори (чотири моїх види та додаткові види в акваріумах інших акваріумістів) можуть переносити та виживати при рівні дози, який вбиває 100% голих гілок та яєчної маси. Погляньте на Пропозиції Boots, щоб переглянути найкращі косметичні засоби! Я не думаю, що ідеальний рівень дози був визначений, але я вважаю, що це лікування є перспективним для лікування Montipora, паразитуючих на еолідах шкідників. Існують також голожаберники та сонячні равлики (Heliacus spp.), які полюють на зоантид, і, хоча ефективність лікування голожаберників та сонячних равликів зоантид не була перевірена, очевидно, зоантиди переносять обробку перманганатом калію. Інші види коралів явно чутливі і мають високу смертність при впливі цієї хімічної речовини, тому це не є лікуванням для всіх коралів.

Я закликаю інших зробити свій внесок у цю роботу. Необхідно виміряти концентрацію, тривалість, види, що використовуються, та ефективність. Я не можу не підкреслити, що мої випробування тут є обнадійливими і, до певної міри, успішними, але ці випробування є попередніми і надаються тут для використання з надзвичайною обережністю.Не намагайтеся лікувати рифовий акваріум такими методами. Всі обробки повинні відбуватися в лікувальному резервуарі або контейнері. Перед використанням перманганату калію, будь ласка, ознайомтеся з паспортом безпеки для перманганату калію (наприклад, , оскільки він може бути смертельною сполукою при попаданні всередину організму, а це дотепер не згадуване використання цього продукту. Якщо буде знайдена краща сполука або кращий протокол використання аліцину або перманганату калію, він повинен бути задокументований, повторений і записаний. Якщо є які-небудь питання, коментарі або внески від інших, хто використовує методи, описані в цьому документі, або інші методи, будь ласка, зв’яжіться зі мною за адресою моєї електронної пошти (eborneman@uh.edu).

Andrews, C., A. Exell, N. Carrington. 1988. Посібник зі здоров’я риб: Все, що потрібно знати про акваріумних риб, їхнє середовище та профілактику захворювань. Tetra Press. 208pp.

Bergès, R., M.-H. Siess, I. Arnault, J. Auger, R. Kahane, M.-F. Pinnert, M.-F. Vernevaut, A.-M. le Bon. 2004. Порівняння хіміопрофілактичної ефективності часникових порошків з різним вмістом аллінів щодо канцерогенності афлатоксину В1 у щурів. Канцерогенез 25: 1953-1959.

Borneman, Eric H. 2004. Патології, що впливають на рифові корали в неволі. Proc 10th Int Coral Reef Symp, Okinawa. Анотація.

Мур, С.Дж. та А.Д. Ленглет. 2004. Огляд рослин, що використовуються як репеленти від комах. В: Репеленти від комах: Принципи, методи та використання. (Деббун, М., Френсіс, С.П. і Стрікман, Д., ред.) CRC Press, Taylor & Francis Group Boca Raton Florida. Стор. 343-363.

Рао, І.Г. та Д.К. Сінгх. 2002. Токсичний ефект одноразової та бінарної обробки синтетичними та рослинними молюскоцидами проти Achatina fulica. J Appl Toxicol 22: 211- 215.

Schüder, I., G. Port, J. Bennison. 2004. Поведінкова реакція слимаків та равликів на нові молюскоциди, подразники та репеленти. Pest Manag Sci 60: 1171-1177.

Шадкчан Ю., Шемеш Є., Мірельман Д., Мирон Т., Рабінков А., Вільчек М., Ошеров Н. Поведінкова реакція слимаків та равликів на нові молюски, подразники та репеленти. 2004. Ефективність аліцину, реактивної молекули часнику, в інгібуванні Aspergillus spp. in vitro та в мишачій моделі дисемінованого аспергільозу. J Antimicrob Chemother 53; 832-836.

Сінгх, А. та Д.К. Сінгх. 2004. Вплив рослинних молюсцицидів та їх комбінацій на розмноження равлика Lymnaea acuminata. Arch Env Contam Toxicol 46: 470-477.

Сінгх, А. та Д.К. Сінгх. 2003. Інгібування ферментів рослинними молюскоцидами в нервовій системі равлика Lymnaea acuminata. J Sci, Isl Rep Iran 14: 227-233.

Сінгх, В.К., Д.К. Сінгх. 1999. Інгібування ферментів аліцином, молюскоцидним агентом Allium sativum L. (Часник). Phytother Res 10: 383-386.

Сінгх, С., С. Судхір, С. Агарвал, К. Сантош, С. Верма, М.С. Сіддікі, С. Кумар. 1998. Хімія часнику (Allium sativum) з особливим посиланням на аліїн та аліцин: Огляд. J Med Arom Plant Sci 20: 93-100.

Сукумаран, Д., Б.Д. Парашар та К.М. Рао. 2002. Оцінка деяких рослинних молюсцицидів проти прісноводного равлика, Lymnaea luteola, переносника шистосомозу тварин. Pharm Biol 40: 45-455.

Whitby, P. 2007. Montipora їсть голі гілки. .

Додаткові джерела про алліум та аліцин

Анкрі С., Мирон Т., Рабінков А., Вільчек М., Мірельман Д. 1997. Аліцин з часнику сильно інгібує цистеїнові протеїнази та цитопатичні ефекти Entamoeba histolytica, Antimicrob. Agents Chemother. 10: 2286-2288.

Блок Е. 1985. Хімія часнику та цибулі, Sc. Am. 252: 94-99.

Cavallito C., Bailey J.H. 1944. Аліцин, антибактеріальний принцип Allium sativum.

Виділення, фізичні властивості та антибактеріальна дія, J. Am. Chem. Soc. 66: 1944-1952.

Celiini L., Di Campli B., Masulli M., Di Bartolomeo S., Aliocati N. 1996. Інгібування Helicobacter pylori екстрактом часнику (Allium sativum), FEMS Immenol. Med. Micrbiol 13: 273-277.

Chowdhury A.K., Ahsan M., Islam S.N., Ahmed Z.U. 1991. Ефективність водного екстракту часнику та аліцину при експериментальному шигельозі у кроликів, Ind. J. Med. Res. 93: 33-36.

Darbyshire B., Henry R.J. 1981. Відмінності у вмісті та синтезі фруктанів у деяких видах Allium, New Phytol. 87: 249-256.

Девіс Л.Б., Шен 3, Ровер Р.Е. 1994. Синергізм in vitro концентрованого екстракту Allium sativum та амфотерицину В проти Cryptococcus neoformans. Planta Med. 60: 546-549.

Ellmore G.S., Feldberg R.S. 1994. Локалізація аліїнліази в пучкових оболонках зубчика часнику (Allium sativum), Am. J. Bat. 81: 89-94.

Focke M., Feld A., Lichtenthaler K. 1990. Аліцин, природний антибіотик з часнику, специфічно інгібує ацетил-КоА-синтетазу, FEBS Let. 261: 106-108.

Фельдберг Р.С., Чанг С.С., Котик А.Н., Надлер М., Нойвірт З., Сундстром Д.С., Томпсон Н.Х. 1988. Механізм інгібування росту бактеріальних клітин аліцином in vitro, Antimicrob. Agents Chemother. 32: 17631768.

Girnenez M.A., Solanes R.E., Girneriez D.F., Ріст Clostridium botulinum на середовищах з часником, Rev. Argent. Microbioi. 20: 17-24.

Gonzalez-Fandos F., Garcia-Lopez Mi., Sierra Mi., Otero A. 1994. Стафілококовий ріст і синтез ентеротоксинів (A-D) та термонуклеази в присутності зневодненого часнику, J. Appl. Bacteriol. 77: 549-552.

Hughes E.G., Lawson L.D. 1991. Антимікробні ефекти сполук часнику Allium sativum L. (I часник), Allium ameelopratrum (слонячий часник) та Allium cepa L. (цибуля) та комерційних добавок до часнику, Phytother. Рез. 5: 154-158.

Кох Х.П., Лоусон Л.Д. 1996. Часник, наука і терапевтичне застосування Allium sativum L. і споріднених видів, Вільямс і Вілкінс, Балтімор: с. 1-233.

Лоусон Л.Д. 1996. Склад та хімія зубчиків часнику та переробленого часнику, в: Кох Х.П., Лоусон Л.Д. (Ред.), Часник: наука і терапевтичне застосування Allium sativum L., Вільямс і Вілкінс, Балтімор, 1996, с. 37-108.

Мірельман Д., Мотшайт Д., Ватон С. 1987. Інгібування росту Enantomoeba histolytica аліцином, активним принципом екстракту часнику (Allium sativum), J. Infect. Dis. 156: 243-244.

Рабінков А., Мирон Т., Консрантіновський Л., Вільчек М., Мірельман Д., Вайнер Л. 1998. Механізм дії аліцину: захоплення радикалів і взаємодія з тіолвмісними білками, Біохім. Biophys. Acta 1379: 233-244.

Рабінков А., Вільчек М., Мірельман Д. 1995. Квасці (алюмоліаза) часнику (Allium sativum) глікозилюється за ASN146 і утворює комплекс з маннозоспецифічним лектином часнику, Glycoconj. 312: 690-698.

Рабінков А., Сяо-Чжу З., Графл Г., Галілі Г., Мірельман Д. 1994. Алюмоліаза (аліїназа) з часнику (Allium sativum): Біохімічна характеристика та кДНК-клонування, Appl.Biochem.Biotechnol. 48: 149-171.

Stall A., Seebeck E. 1951. Хімічні дослідження алліну та специфічний принцип дії часнику, Adv. Enzymol. 11: 377-400.

Tsai Y., Cole L.L., Davis L.E., Lockwood S.J., Simmons V., Wild G.C. 1985. Противірусні властивості часнику: вплив in vitro на віруси грипу В, простого герпесу та Коксакі, Planta Med. 5: 460-461.

Uchida Y., Takahashi T., Sato N. 1975. Характеристика антибактеріальної активності часнику, Jpn J. Antibiotics 28: 638-642.

Urbina J.A., Marchan F., Lazardi K., Visbal G., Apitz-Castro R., Gil F., Aguirre T., Piras M.M., Piras R. 1993. Інгібування біосинтезу фосфатидилхоліну та проліферації клітин Trypanosoma cruzi аджоеном, антитромбоцитарною сполукою, виділеною з часнику, Biochem. Pharmacol. 45: 2381-2387.

Van Damme, Smeets K., Torrekens S., Van Leaven F., Peumans W.J. 1992. Виділення та характеристика клонів кДНК аліїнази з часнику (Allium sativum L.) та споріднених видів, Eur. J. Biochem. 209: 751-757.

Yamada Y., Azuma K. 1997. Оцінка протигрибкової активності аліцину in vitro, Antimicrob. Agents Chemother. 1: 743-749.

Source: reefkeeping.com