Определение общего количества копепод

Вы приобрели пакет копепод (стручков), но застряли между выбором. Компания А заявляет о внушительном количестве стручков, но ее пакет практически прозрачен. Пакет компании Б выглядит многообещающе, но в нем заявлено такое низкое количество стручков, что возникает вопрос, не больше ли в нем “наполнителей”, чем стручков. Слишком часто владельцы рыб оказываются в неведении, когда им нужно знать, сколько копепод они действительно получают. При покупке стручков важно помнить, что живые стручки находятся в постоянном цикле роста и могут сильно отличаться по размерам (РИСУНКИ 1, 2 и 3), в зависимости от стадии роста. _{РИСУНОК 1: Изменения среднего размера (мкм) от яйца до взрослой особи у Tisbe biminiensis и Tigriopus californicus (Pinto, Souza-Santos, & Santos, 2001; Powlik, Lewis, & Spaeth, 1997)1 . В зависимости от стадии роста капсулы, размер ее тела может сильно варьироваться. Икринки и копеподиты могут продолжать проходить циклы роста во время хранения и в аквариуме.}

_{РИСУНОК 2: Разница в размерах между копеподитом Tigriopus californicus (слева) и взрослой особью (справа) из линейки продуктов Poseidon’s Feast при 40X . Пакеты Poseidon’s Feast газопроницаемы и содержат питательные вещества для максимального роста стручков во время транспортировки и хранения.}

_{РИСУНОК 3: Разница в размерах между взрослой особью Tigriopus californicus (слева) и яйцом (синяя стрелка; лизировано) из линейки продуктов Poseidon’s Feast при 100X. Пакеты Poseidon’s Feast газопроницаемы и содержат питательные вещества для максимального роста стручков во время транспортировки и хранения.}

Поскольку стручки могут меняться в течение цикла роста во время транспортировки и хранения или во время нахождения в аквариуме, знать их общее количество полезнее, чем просто обратить внимание на несколько крупных стручков. Так, в мешках компаний А и В может содержаться одинаковое количество стручков, но в одном из них может быть больше яиц и копеподитов, а в другом – больше зрелых стручков.

В этом документе мы проиллюстрируем один из способов оценки количества стручков, показав, как компания AlgaeBarn определяет плотность стручков в своей линейке смеси копепод Poseidon’s Feast.

_{1 Также AlgaeBarn, LLC, 2015 г.}

ОЦЕНКА КОЛИЧЕСТВА КОПЕПОД [РЕЗЮМЕ]

Количество стручков в контейнере может быть оценено путем подсчета количества стручков в небольшой выборке и, используя ряд пропорций, вычисления оценки количества стручков во всей популяции (РИСУНОК 4). _{РИСУНОК 4: Общий подход к определению оценки количества стручков. Выборочный подсчет из контейнера со стручками обычно может быть непосредственно использован для оценки общего количества стручков в популяции (зеленые стрелки). При желании раствор стручков можно сначала сконцентрировать или разбавить перед подсчетом, если раствор слишком светлый или густой, соответственно (оранжевые стрелки). При подсчете необходимо учитывать фактор концентрации или разбавления.}

Следует использовать сложный световой микроскоп с увеличением не менее 40X, который может быть использован для визуализации стручков всех размеров – от науплиев до взрослых особей. Важно отметить, что эти методы учитывают только видимые стручки. Поскольку яйца и науплии ранних стадий копепод исключаются, фактическое количество стручков, скорее всего, будет даже больше, чем расчетное.

Оценка плотности стручков

Сначала необходимо проверить раствор стручков, чтобы убедиться, что он имеет оптимальную плотность – не слишком много и не слишком мало стручков – для подсчета. После того как раствор стручков хорошо встряхнут, 0,1 мл образца рассеивается на предметное стекло микроскопа; для этого можно использовать шприц объемом 1 мл. При 40X весь образец просматривается через ограниченное поле зрения окуляров для оценки плотности стручков.

Если используемый контейнер со стручками слишком разбавлен (т.е. вы видите слишком мало стручков в образце под 40X; например, менее 3 стручков/0,1 мл), то раствор следует сконцентрировать и учесть фактор концентрации при оценке; см. раздел “Концентрирование плотности стручков”. С другой стороны, если используемый контейнер со стручками слишком плотный (т.е. вы видите слишком много стручков в пробе, например, более 15 стручков/0,1 мл), то пробу следует разбавить и учесть фактор разбавления в расчетах; см. раздел “Разбавление плотности стручков”. Если ни концентрирование, ни разбавление не требуется, то стручки готовы к подсчету; см. непосредственно “Подсчет стручков пробы”. Прежде чем перейти к любому разделу, необходимо записать объем раствора стручков (в мл); для измерения можно использовать градуированный цилиндр (следите за тем, чтобы при переливании туда и обратно терялось как можно меньше стручков).

Обратите внимание, что предложенная оптимальная плотность стручков 3-15 стручков/0,1 мл раствора образца может быть хорошей отправной точкой, но в конечном итоге оптимальная плотность будет основана на количестве стручков/0,1 мл, которое вам удобно отслеживать с помощью микроскопа.

КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ПЛОТНОСТИ СТРУЧКОВ

Хотя хорошей отправной точкой является концентрация в 2 раза, применение следующего уравнения позволит вам использовать любой коэффициент концентрации: Одним из способов достижения коэффициента концентрации 2 является фильтрование ровно 1⁄2 исходного объема раствора (измеренного градуированным цилиндром) через сетчатый фильтр (например, 50 мкм) – захват всех стручков при удалении жидкости. После того, как захваченные стручки будут перенесены обратно в оставшийся раствор, оставшийся объем (теперь уже концентрированный объем) можно проверить с помощью градуированного цилиндра, который должен быть на 1⁄2 меньше исходного объема.

РАЗБАВЛЕНИЕ ПЛОТНОСТИ СТРУЧКОВ

Хотя хорошей отправной точкой является разбавление в 2 раза, применение следующего уравнения позволит вам использовать любой коэффициент разбавления: Раствор стручков можно разбавить в 2 раза, добавив чистую соленую воду (sp. gr. 1.025) в контейнер для стручков в объеме, равном объему исходного раствора (как измерено градуированным цилиндром). Затем разбавленный объем можно проверить с помощью градуированного цилиндра, который должен быть в два раза больше первоначального объема.

ПОДСЧЕТ ПРОБНЫХ КАПСУЛ

На данном этапе раствор стручков должен иметь идеальную плотность для подсчета, либо в результате концентрирования (далее “Концентрирование плотности стручков”) или разбавления (далее “Разбавление плотности стручков”), либо потому, что он уже имел идеальную плотность (далее “Оценка плотности стручков”).

Для эффективного подсчета стручков их необходимо сначала обездвижить. Одним из способов сделать это является смешивание образца стручков, подлежащего подсчету, со спиртовым раствором: после того, как раствор стручков хорошо встряхнут, 0,1 мл образца смешивается с 20 мкл спирта для растирания, переносимого с помощью пипетки в микроцентрифужную пробирку. Смесь спирта и пробы стручков переносится на предметное стекло микроскопа. На этот раз цель состоит в том, чтобы рассмотреть и осмотреть каждую часть образца через ограниченное поле зрения окуляров, подсчитывая и записывая количество каждого увиденного стручка (в стручках/0,1 мл). После завершения подсчета предметное стекло микроскопа протирается, и процесс иммобилизации и подсчета 0,1 мл образца стручков повторяется еще несколько раз; большее количество исследований обеспечит более точную оценку общего количества стручков. При использовании метода выборки без замены объем стручков и раствора, удаляемого в каждом испытании, по отношению ко всему объему контейнера настолько мал, что эффект, скорее всего, будет незначительным для общей оценки стручков.

ОЦЕНКА ОБЩЕЙ ПЛОТНОСТИ СТРУЧКОВ

После того, как будет проведено несколько пробных подсчетов стручков, полученные цифры будут использованы для расчета оценки количества стручков во всем растворе (РИСУНОК 5). _{РИСУНОК 5: Примерные расчеты для определения оценки количества стручков. Как показано с помощью произвольных чисел, общая оценка количества стручков на мешок может быть определена с использованием пропорций с количеством стручков/0,1 мл. Приведенный выше расчет показывает сценарий, в котором раствор стручков концентрируется перед подсчетом, чтобы проиллюстрировать, как можно использовать коэффициент концентрации. Образцы расчетов для других испытаний аналогичны расчету для испытания 1.}

Для каждого испытания количество стручков/0,1 мл (из раздела “Подсчет стручков пробы”) умножается на 10 для расчета количества стручков/мл. Затем количество стручков/мл умножается на общий объем раствора стручков (из раздела “Оценка плотности стручков”, “Концентрирование плотности стручков” или “Разбавление плотности стручков”). Если раствор стручков был сконцентрирован, то произведение [(количество стручков/мл)(общий объем раствора стручков)] делится на коэффициент концентрации; если раствор стручков был разбавлен, то произведение умножается на коэффициент разбавления. Таким образом, количество стручков/контейнер будет рассчитано для каждого испытания, а средняя оценка плотности стручков может быть рассчитана путем нахождения среднего значения оценок количества стручков/контейнера.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При покупке стручков мы часто бросаемся в бегство при первом же взгляде на большой размер, часто упуская из виду и сорт, и количество. Хотя размер, безусловно, пропорционален содержанию питательных веществ, полезнее помнить, что стручки имеют значительные различия в размерах, а рост продолжается даже во время хранения. Таким образом, плотность популяции копепод является бесценным показателем для определения общего содержания питательных веществ в контейнере со стручками. Использование методов, описанных в данной статье, позволит владельцам рыб принимать более обоснованные решения при покупке капсул.

Компания AlgaeBarn постоянно использует эти методы для обеспечения разнообразия и плотности популяции копепод в каждом пакете Poseidon’s Feast.

_Ссылки

_{1 Pinto, C., Souza-Santos, L., & Santos, P. (2001). Развитие и динамика популяции Tisbe biminiensis (Copepoda: Harpacticoida), выращенных на различных диетах. Aquaculture, 198(3-4), 253-267. doi:10.1016/S0044-8486(00)00582-2}

_{2 Powlik, J., Lewis, A., & Spaeth, M. (1997). Развитие, длина тела и питание Tigriopus californicus (Copepoda, Harpacticoida) в лабораторных и полевых популяциях. Crustaceana, 70(3), 324-343. doi:10.1163/156854097X00609}

AlgaeBarn, LLC

5900 E. 58th Avenue, Suite A Commerce City, CO 80022

www.algaebarn.com | Sales: [email protected]

© 2015-2019 AlgaeBarn, LLC. Все права защищены.

Взаимодействие с читателями

Комментарии

1. Kristy Chambers says April 25, 2019 at 2:33 pm

Этот блог был настолько интересным и информативным! Спасибо вам, ребята, за то, что вы вкладываете в это все! Я люблю вашу страсть!!! Another Satisfied Customer ?

• Noah говорит 7 августа 2019 в 6:36 вечера

• Stefan Bladen says August 28, 2019 at 5:43 am

Source: algaebarn.com