Действительно ли это в воде? Критическое переосмысление токсичных металлов, часть 3

На ежегодной встрече Общества интегративной и сравнительной биологии в 1998 году доктор Брюс Карлсон рассказал об успехах аквариума Вайкики в разведении Acropora и других каменистых кораллов. Зал, полный профессиональных ученых, изучающих коралловые рифы, внимательно слушал, пока доктор Карлсон объяснял, что любители рифов с таким же успехом выращивают кораллы у себя дома. После встречи д-р Карлсон был быстро окружен группой ученых, которые хотели узнать больше о том, как нам удалось сохранить кораллы живыми в течение многих лет, что удалось немногим ученым. С тех пор удивление, выраженное этими учеными, повторялось много раз. Неизменно ученые, изучающие коралловые рифы, впервые увидев рифовый аквариум, бывают шокированы и удивлены нашим успехом. Они понимают, что мы, “гражданские лица”, добились большего в области коралловодства, чем профессионалы в этой области. В этом отношении профессионалы ценят то, чего мы достигли, даже больше, чем хобби. Очевидно, что для создания успешного рифового аквариума не требуется докторская степень, а докторская степень не гарантирует успеха в хобби.

Одна из причин, по которой мы не ценим наш успех так высоко, как следовало бы, заключается в том, что мы, кажется, всегда на шаг впереди катастрофы. Будь то потеря одного ценного животного или полный крах аквариума, все мы переживаем свою долю неудач. Как никакая другая эмоция, призрак неудачи, похоже, определял развитие хобби в последнее десятилетие. Как еще можно объяснить слишком частое явление, когда успешные хоббисты меняют многое из того, что они делают, потому что другие хоббисты заявили об успехе, делая что-то совершенно другое.

Рифовый аквариум – это сложная система механических и биологических компонентов. В нем много движущихся частей. Катастрофы, как правило, могут быть связаны с отказом одной или нескольких из этих частей. Будь то катастрофический отказ головки питания, непреднамеренная дозировка большого количества калквассера, незамеченная смерть обитателя аквариума, загрязнившего аквариум, или любая другая из практически безграничного числа возможных проблем, первопричину проблемы обычно можно определить. Однако есть события, которые не поддаются объяснению. Необъяснимая смерть, когда животное ведет себя нормально в один день, а на следующий уже мертво. Синдром старого аквариума (OTS) – явление, наблюдавшееся много раз, когда аквариум, содержащийся в постоянном режиме, процветает в течение многих лет, а затем постепенно ухудшается и, возможно, даже разрушается. Это самые тревожные неудачи, с которыми мы сталкиваемся, потому что у нас нет им объяснения. Мы не знаем, что мы делаем неправильно, поэтому у нас нет возможности определить, что мы должны делать по-другому.

Неопределенность порождает уязвимость, и слишком часто находятся те, кто играет на наших страхах как на средстве достижения целей. Живя, как хоббиты, на шаг впереди катастрофы, слишком многие готовы слепо принимать решения, которые обещают оттянуть нас от пропасти всего на один шаг. Любой, кто предлагает возможное объяснение и решение этих проблем, находит внимательную и благожелательную аудиторию. Однако правда заключается в том, что эти проблемы могут быть неразрешимыми. Возможно, мы никогда не определим первопричину таких проблем, как OTS. Возможно, даже не существует какой-то одной проблемы, а есть комбинация факторов. Вот почему мы должны с опаской относиться к любому простому объяснению, которое претендует на решение целого ряда проблем. Мы должны критически изучить предлагаемое объяснение. Какие доказательства подтверждают это объяснение? Насколько сильны доказательства?

Эта третья статья из серии статей представляет собой пересмотр мнения одного любителя о том, что многие необъяснимые проблемы, с которыми мы сталкиваемся в рифовых аквариумах, вызваны накоплением токсичных тяжелых металлов. “Я думаю, что причина многих необъяснимых смертей скрывается в наших аквариумах и даже поощряется или подчеркивается благонамеренными аквариумистами. Моя гипотеза заключается в том, что основной причиной многих, если не всех, таких необъяснимых смертей является отравление тяжелыми металлами. Я считаю, что это отравление металлами связано именно с чрезмерно высокой концентрацией некоторых микроэлементов, которые присутствуют в аквариумной воде”. (Шимек 2002) Хотя автор предполагает, что отравление тяжелыми металлами – это всего лишь гипотеза, в он-лайн обмене мнениями он заявил, что это гораздо больше, чем гипотеза. Вскоре после публикации этой цитаты автор ответил на вопрос одного из пользователей таким образом: “Вы можете считать идею о смертности танков из-за накопления химических веществ теорией. Это не так. Я собрал необходимые данные и провел необходимые тесты, чтобы показать, что это доказанный факт. В течение следующего месяца или около того я дополнительно проведу несколько прямых биопроб личинок морского ежа на различных солевых смесях, чтобы забить последние гвозди в этот гроб”. Таким образом, еще до проведения дальнейших исследований автор считал данные о токсичности искусственной морской воды “доказанным фактом”.

Редакторы журнала Marine Pollution Bulletin осудили снижение научной объективности. Они писали: “Неправильно и опасно для ученого становиться личным и негибко “привязанным” к теории. Негибкая привязанность к теории, независимо от того, считает ли ученый ее своей, мешает ему думать о более полезных теориях”. (Chapman & Giddings 1997) По мере того, как мы продолжаем это исследование, читатели должны помнить слова Чепмена и Гиддингса. Увлечение приносит наибольшую пользу, если рассматривать любое предлагаемое объяснение необъяснимых явлений с некоторым скептицизмом. Как мы покажем, несмотря на уверенность автора, его гипотеза далеко не доказана, а выводы далеки от фактов.

Если это в воде, то она токсична?

Чтобы доказать, как утверждает автор, что высокая концентрация некоторых тяжелых металлов вызывает необъяснимую смертность в рифовом аквариуме, мы должны доказать, что 1) уровень тяжелых металлов в среднем рифовом аквариуме значительно превышает уровень, обнаруженный в природной морской воде, 2) что эти повышенные металлы в обнаруженных концентрациях токсичны, и 3) что токсичность “объясняет” необъяснимую смертность. Если какая-либо часть этой трехчастной гипотезы окажется ложной, то гипотезу придется отвергнуть. К сожалению, третий элемент практически невозможно доказать, если не проводить некропсию каждого организма, который умирает в рифовом аквариуме. Чтобы доказать, что токсичные уровни какого-либо вещества убили организм, мы должны провести тест на наличие предполагаемых веществ. Очевидно, что это непрактично. Следовательно, по правилам проверки гипотез мы должны отвергнуть гипотезу, даже не исследуя первые два элемента гипотезы. Тем не менее, первые два элемента достаточно интригующие, чтобы пересмотреть “доказательство” автора.

Во второй части этой серии мы показали, что анализ природных вод коралловых рифов с помощью ICP-сканирования показал, что концентрация тяжелых металлов в собранной воде была значительно выше, чем опубликованные данные по морской воде. (Harker 2004) Более того, анализ показал, что уровни тяжелых металлов в воде коралловых рифов очень похожи на уровни металлов в моих собственных рифовых аквариумах и лишь немного ниже, чем те, о которых сообщалось ранее для рифовых аквариумов. Возможно, морская вода естественных коралловых рифов имеет повышенные уровни металлов по сравнению с открытым океаном. Возможно, сложная природа морской воды не позволяет ICP-сканированию дать точное представление о содержании металлов в морской воде. В любом случае, у нас нет достаточных доказательств, чтобы сделать вывод о том, что в рифовых аквариумах повышенный уровень тяжелых металлов. Поэтому мы вынуждены отвергнуть первый элемент предложенной автором гипотезы о том, что в среднем рифовом аквариуме концентрация тяжелых металлов намного выше, чем в природной морской воде.

Сравнивая уровни содержания металлов в воде кораллового рифа с уровнями, которые считаются токсичными, по мнению Шимека в работе “Our Coral Reef Aquaria-Our Own Personal Experiment in the Effects of Trace Element Toxicity”, можно сделать вывод, что природная вода кораллового рифа сама по себе токсична. (Shimek 2002) Автор приводит целый ряд исследований токсичности, которые показывают вредное воздействие металлов на более низких уровнях, чем я указал для природной воды коралловых рифов. Как такое может быть? Потому что не все металлы в морской воде токсичны. В одном из исследований токсичности авторы напоминают нам, что “загрязняющие вещества токсичны только в том случае, если они попадают в ткани организма”. (Hook & Fisher 2000) Чтобы быть токсичным, металл должен быть биодоступным, то есть находиться в форме, которая может быть поглощена в тканях организма. (Meyer 2002) Автор пишет: “Общая концентрация металла в толще воды не является хорошим предсказателем острой токсичности. Из-за присутствия модифицирующих факторов (растворенных и твердых частиц) потенциал взаимодействия металла с биотическими лигандами часто будет меньше, чем указывает общая концентрация металла”. В недавней статье Advanced Aquarist объясняется, что потенциально токсичные элементы существуют во многих соединениях, лишь немногие из которых являются токсичными. (Sekha 2003) Только часть металлов, обнаруженных в морской воде, является биодоступной. Большая часть металлов, обнаруженных в морской воде, существует в форме, которая не является легкодоступной для организмов, и поэтому не является токсичной.

Распределение между различными формами металла называется видообразованием. Вообще говоря, существует три растворенные формы металла. Металлы могут присутствовать в виде свободного гидратированного иона, в неорганических комплексах или в органических комплексах. (Valasquez, et al., 2002) Свободная ионная форма считается биодоступной, в то время как органические и неорганические комплексы обычно считаются не биодоступными. (Sundra & Guillard 1976) В дополнение к этим растворенным формам, металлы могут осаждаться или сорбироваться на твердых поверхностях, особенно карбонатных. (Mwanuzi & De Smedt 1999) Поскольку ионное состояние является единственной токсичной формой металла, о которой мы должны беспокоиться, нам необходимо измерять именно ионный компонент. К сожалению, ICP-сканирование не может различать различные формы металла. Оно говорит нам только об общем количестве ионных, неорганических и органических комплексов. Хотя существуют аналитические методы, позволяющие определить видовую принадлежность тяжелых металлов в морской воде, эти тесты не проводились в рифовых аквариумах.

Как правило, токсичная ионная доля металла в морской воде обычно низка. Большинство тяжелых металлов в морской воде органически или неорганически связаны и поэтому нетоксичны. В зависимости от исследования, ионные металлы могут составлять от 20-30% от общего количества растворенных металлов. Это означает, что 70-80% концентрации тяжелых металлов в морской воде не находятся в форме, токсичной для обитателей рифовых аквариумов. Это не означает, что металлы стали окончательно нетоксичными, только то, что на момент анализа они были нетоксичными. Любой любитель, который добавлял в аквариум медь, пытаясь избавить рыб от паразитов, испытал этот эффект на собственном опыте. Очень трудно поддерживать постоянный уровень ионной меди в аквариуме, особенно если в нем есть песок или живой камень. В то время как уровень общей меди остается неизменным, тестирование на медь покажет, что уровень меди снижается. Любительские тесты на медь измеряют ионную медь. Поскольку медь вступает в комплекс с органическими соединениями и сорбируется на карбонате кальция, доля ионной меди снижается, как и токсичность меди. Так происходит со всеми металлами, которые попадают в рифовый аквариум.

Что насчет биопроб?

По словам автора, “последним гвоздем в крышку гроба” относительно токсичности воды в рифовых аквариумах стал биоанализ морских ежей. (Shimek 2003) Однако, как ни странно, в биопробе в первую очередь оценивалась “свежеприготовленная искусственная морская вода”, а не вода из рифовых резервуаров, поэтому исследование в итоге пролило гораздо меньше света на проблему токсичности воды из рифовых резервуаров, чем если бы использовалась вода из рифовых резервуаров. В ходе биопробы организм подвергается последовательному воздействию более высоких уровней токсина, чтобы определить уровень, при котором животное становится неполноценным или погибает. В биопробах на тяжелые металлы для организмов, обитающих в морской воде, обычно используются соединения металлов, которые диссоциируют в морской воде. Добавление сульфида меди или хлорида меди в морскую воду высвобождает контролируемое количество ионных металлов в воде. Следовательно, практически весь металл является биодоступным. При попытке соотнести летальный уровень металлов в биопробе с уровнем металлов в рифовом аквариуме важно помнить, что практически весь металл в биопробе токсичен, в то время как в рифовом аквариуме токсична лишь часть измеряемого металла. Вот почему результаты опубликованных биопроб имеют ограниченную ценность для любителей.

Многие нежные животные легко размножаются в зрелом рифовом аквариуме. Самка амфиподы несет в своем брюшке скопление яиц. Личинка полихеты имеет длину менее 0,1 мм.

В первой части этого обзора я упомянул, что важно изучить раздел “методы” любой статьи, чтобы определить, являются ли использованные методы правильными и способными достичь намеченной цели исследования. Один из способов сделать это – прочитать соответствующую научную литературу, чтобы узнать, следовал ли автор принятым методам. К счастью, исследования токсичности хорошо финансируются, и научная литература изобилует примерами. Возможно, самым интересным было исследование влияния меди на личинки десятиногих моллюсков. (Вонг и др., 1995). Авторы использовали искусственную морскую воду Instant Ocean в качестве контрольной среды. Авторы заявили: “Искусственная морская вода широко использовалась в нашей лаборатории для культивирования личинок и потомства Metapenaeus ensis и не оказала отрицательного воздействия на рост и развитие”. Когда команда профессиональных ученых, публикующих исследования в таком уважаемом журнале, как “Вестник загрязнения морской среды”, использует Instant Ocean для выращивания личинок, следует скептически относиться к утверждению, что искусственная морская вода токсична.

В другой работе по биопробе авторы использовали биокристаллы Forty Fathoms. (Rumbold & Snedaker 1997) Авторы отмечают, что искусственная морская вода выдерживалась при интенсивной аэрации более 48 часов и фильтровалась перед использованием. Это дает одну подсказку, почему профессиональные исследователи могут спокойно использовать искусственную морскую воду, которую автор-любитель назвал токсичной. В биопробах не используется “свежеприготовленная” искусственная морская вода. Ученые прилагают большие усилия для подготовки контрольной воды, которая может поддерживать здоровье организма. Если используется природная морская вода, обычно ее предварительно фильтруют, а затем перед использованием корректируют pH и соленость. Если используется искусственная морская вода, ее выдерживают в течение некоторого времени, а затем предварительно фильтруют перед использованием. На протяжении десятилетий ученые-исследователи подчеркивали важность старения искусственной морской воды. (Bidwell & Spotte 1985). Формула Госсе для искусственной морской воды, датируемая 1854 годом, как сообщается в книге Bidwell & Spotte, рекомендует фильтровать раствор через губку и выдерживать, добавляя “несколько чистых береговых камешков и несколько веточек зеленых водорослей”. Госсе рекомендовал добавлять животных через неделю. Сто пятьдесят лет назад ученые оценили важность выдержки искусственной морской воды, поэтому непонятно, почему бы автору-любителю не следовать общепринятым методам при подготовке своих образцов. Свежеприготовленная искусственная морская вода по своей природе токсична, но по мере старения она становится менее токсичной. Именно поэтому с 1854 года исследователи выдерживают искусственную морскую воду. Проведение биопробы на свежеприготовленной искусственной морской воде может определить, насколько быстро растворяется одна соль по сравнению с другими, но это ничего не говорит нам о том, является ли какая-либо из солевых смесей токсичной по истечении разумного периода времени.

К счастью, в биопробу также была включена вода из двух рифовых аквариумов любителей, поэтому результаты, полученные в этих двух аквариумах, могут дать некоторое представление. Оба любителя использовали Instant Ocean. Один из них готовит воду с помощью RO/DI, а другой использует колодезную воду. У нас есть одна контролируемая переменная – солевая смесь Instant Ocean. У нас есть одна известная переменная – исходная вода, RO/DI против колодезной воды. Биопроба показала, что в среднем в пять раз больше личинок выжило в воде, которую использовал любитель, использующий воду RO/DI, по сравнению с водой из колодца. Поскольку оба любителя использовали Instant Ocean и между двумя аквариумами была статистически значимая разница, мы должны исключить солевую смесь как возможное объяснение разницы.

Оба любителя использовали Instant Ocean, но только один из них оказался высокотоксичным для личинок морского ежа. Почему? Мы не знаем. Ничто в исследовании не указывает на то, что вода подвергалась химическому анализу. В отсутствие анализов на содержание металлов в двух резервуарах мы не можем определить, повлияло ли содержание металлов на результат. Возможно, колодезная вода содержала более высокие уровни металлов, чем вода RO/DI. Возможно, вода из колодца была загрязнена пестицидами. Возможно, причиной было что-то, не связанное с колодезной водой. В любом случае, мы можем исключить смесь солей как источник проблемы. Несмотря на уверенность автора, это исследование не является последним гвоздем в гроб дискуссии. Более того, поскольку большинство личинок в воде одного любителя выжили, это вызывает дополнительные вопросы о том, действительно ли рифовые аквариумы настолько токсичны, как их представляют.

Так что же такое токсичный уровень?

На этих графиках обобщены результаты многочисленных исследований биопроб. Почти для всех изученных металлов уровни, обнаруженные в типичных рифовых аквариумах, значительно ниже тех, которые оказались токсичными для изученных организмов. Полную информацию см. в ссылках, приведенных в конце статьи.

Большинство данных о токсичности основаны на биопробах, в которых практически весь металл в растворе является биодоступным. Поскольку большая часть тяжелых металлов в наших рифовых аквариумах не является биодоступной и, следовательно, безвредной, было бы неправильно делать вывод о том, что рифовый аквариум токсичен, если уровень металлов в нем окажется на уровне, признанном токсичным в ходе биопробы. Напротив, мы знаем, что большинство металлов в морской воде не являются биодоступными. В результате, если в рифовом аквариуме общая концентрация металлов равна концентрации, признанной токсичной, можно с уверенностью предположить, что рифовый аквариум не является токсичным. Более того, организмы без особого труда переносят концентрацию металлов чуть ниже опубликованных цифр. К сожалению, у нас нет удобного способа определить, какая доля металлов в рифовом аквариуме является биодоступной, поэтому для начала мы можем предположить, что 100% металлов являются биодоступными, и сравнить эти цифры с результатами биопробы. Это крайне маловероятное предположение, но оно дает огромную погрешность.

Выборочные результаты нескольких исследований токсичности были представлены Шимеком, и представляют собой довольно мрачную картину рифовых аквариумов. Что касается меди, автор пишет: “(воздействие меди) на кораллы является глубоким и происходит при концентрациях ниже тех, которые обычно встречаются в аквариумах”. (Shimek 2003) Чтение полной научной литературы по токсичности металлов показывает совсем другую картину. Было установлено, что в природной воде коралловых рифов содержится 14 мкг/л меди. Обычно результаты биопроб представляются в терминах LC50 – концентрации, которая приводит к 50% смертности за определенный период времени, или IC50 – концентрации, которая вызывает ингибирование какой-либо физиологической функции. Обратите внимание, что при опубликованных уровнях LC50 выживает 50% организмов. Одно исследование показало, что 17,4 мкг/л меди подавляет оплодотворение Acropora millepora, а 110 мкг/л – метаморфоз личинок. (Negri, et al., 2001) В другом исследовании, посвященном Acropora tenuis, авторы обнаружили, что 17,3 мкг/л меди не оказывают существенного влияния на оседание личинок. (Reichelet-Brushett 2000). “Однако концентрации 42 мкг/л и 80,5 мкг/л привели к значительному снижению средней общей численности поселенцев по сравнению с контролем”. Исследование Porites lutea показало, что 10 мкг/л меди не оказывают влияния на дыхание, но 30 мкг/л оказывают значительное влияние. (Alutoin, et al., 2001) В исследовании брюхоногих моллюсков уровни меди ниже 50 мкг/л были благополучно перенесены Nassarius festivus. (Cheng et al., 2002) В другом исследовании медианная летальная концентрация меди составила 46 мкг/л для личинок омара, 50 мкг/л для личинок краба-паука и 3 304 мкг/л для личинок креветки. (Marino-Balsa, et al., 2000) Общее содержание меди в моем аквариуме составляет 9,5 мкг/л, среднее значение из 23 протестированных аквариумов – 24 мкг/л, а самый высокий уровень содержания меди – 38 мкг/л. Из этих исследований ясно, что общий уровень меди, обычно обнаруживаемый в рифовом аквариуме, вполне безопасен для его обитателей. А если учесть, что биодоступная часть меди составляет малую долю от общего уровня, то типичный рифовый аквариум далеко не токсичен.

Это относится и ко всем другим потенциально смертельно опасным металлам. Уровень содержания металлов в среднем рифовом аквариуме значительно ниже токсичного уровня – даже если учитывать общую концентрацию металлов, а не только биодоступную часть. Это не должно удивлять. Копеподы, амфиподы, нематоды и полихеты легко размножаются в большинстве зрелых рифовых аквариумов. Личинки – самые чувствительные организмы в наших аквариумах, и они прекрасно выживают.

Скрывающаяся катастрофа?

Было высказано предположение, что даже если большинство металлов в рифовом аквариуме в целом не являются биодоступными, накопление металлов может привести к катастрофе, если неожиданные события внезапно сделают их биодоступными. Типичный сценарий – снижение pH. Если pH в аквариуме снизится, часть песка растворится, и металлы, адсорбированные на карбонате кальция, могут высвободиться, что приведет к смертельному всплеску металлов. Хотя теоретически такое возможно, какова вероятность этого? Мы знаем, что металлы могут быть химически связаны как с органическими, так и с неорганическими соединениями. Мы также знаем, что относительно небольшая доля ионных металлов существует в морской воде из-за склонности металлов к связыванию с органическими и неорганическими соединениями. Какова вероятность того, что большая часть связанных металлов может высвободиться и стать токсичными?

Мы можем получить некоторую перспективу, изучив лабораторную процедуру восстановления металлов до их ионного состояния. Для определения общего содержания металлов EPA требует, чтобы образцы были восстановлены до pH менее 2, а затем прокипячены в соляной кислоте. Сильные кислоты и чрезвычайно низкий pH высвобождают все связанные металлы, но эти условия настолько далеки от тех, с которыми может столкнуться рифовый аквариум, что мы можем смело исключить возможность подобного высвобождения металлов в рифовом аквариуме. Более вероятным в рифовом аквариуме с низким pH является медленное высвобождение металлов из песка. Однако рифовый аквариум с низким pH обычно имеет высокую органическую нагрузку, поэтому при высвобождении металлов из песка они, скорее всего, будут связываться с органическими соединениями.

Выводы

После изучения научной литературы и анализа ряда статей любителей о токсичности металлов становится ясно, что доказательства, подтверждающие отравление металлами как источник необъяснимых смертей в рифовом аквариуме, далеко не окончательны. Уровни содержания металлов в среднем рифовом аквариуме не являются значительно повышенными, и эти уровни ниже токсичных уровней, указанных в научной литературе. Биопроба воды из рифового аквариума подтверждает этот вывод. Искусственная морская вода, изготовленная из Instant Ocean, поддерживала выживаемость личинок морских ежей, несмотря на то, что автор ранее определил Instant Ocean как одну из наиболее насыщенных тяжелыми металлами солей, которые он исследовал.

Как написали Чепмен и Гиддингс в своей редакционной статье: “Мы понимаем, что теории и идеи требуют больших усилий, иногда в течение многих лет. В этом свете новые идеи или критика, которые могут показаться не вполне обоснованными, могут расстроить, и возникает соблазн дать резкий, пренебрежительный или даже враждебный ответ”. В лучшем случае можно лишь временно отклонить неправомерную критику. Если в теории есть серьезные недостатки (или даже малозаметные), они рано или поздно проявятся. Рано или поздно теория сломается под тяжестью противоречивых доказательств. Убедительные аргументы, риторика и личные нападки на критиков не защитят несовершенную теорию навсегда”. Очевидно, что теория о том, что многое из того, что постигает любителей, является результатом отравления тяжелыми металлами, попадает в эту категорию. Это ошибочная теория, которая трещит под тяжестью противоречивых доказательств. Доказательства, представленные в этой серии, показывают, что можно иметь концентрацию тяжелых металлов, близкую к концентрации в воде коралловых рифов, и значительно ниже уровня, который, как было доказано, является токсичным.

Ссылки

1. Алутоин, С., Дж. Боберг, М. Нистром, М. Теденгрен. 2001. Влияние многочисленных стрессовых факторов – меди и пониженной солености – на метаболизм герматипического коралла Porities lutea. Морские экологические исследования 52:289-299.
2. Bidwell, J.P., S. Spotte. 1985. Формулы и методы искусственной морской воды. Jones & Bartlett Publishers, Boston MA.
3. Чепмен, П.М., Дж.М. Гиддингс. 1997. Ученым нужны хорошие манеры, чтобы быть учеными. Бюллетень по загрязнению морской среды 34:852.
4. Cheung, S.G., K.K. Tai, C.K. Leung, Y.M. Siu. 2002. Влияние тяжелых металлов на выживание и кормовое поведение брюхоногого моллюска Nassarius festivus, обитающего на песчаном берегу. Вестник загрязнения морской среды 45:107-113.
5. Гилберт, А.Л. и Гектор М. Гузман. 2001. Биоиндикационный потенциал активности карбоновой ангидразы в анемонах и кораллах. Бюллетень загрязнения морской среды 42:742-744.
6. Густафссон, О., П.М. Гшвенд. 1997. Водные коллоиды: концепции, определения и современные проблемы. Лимнология и океанография 42:519-528.
7. Харкер, Р. 2004. Действительно ли это в воде? Advanced Aquarist том 3 номер 1.
8. Хук, С.Е., Н.С. Фишер. 2001. Репродуктивная токсичность металлов в каланоидных копеподах. Морская биология 138:1131-1140.
9. Izquierdo, C., J. Usero, I. Gracia. 1997. Speciation of heavy metals in sediments from salt marshes on the southern Atlantic Coast of Spain. Бюллетень загрязнения морской среды 34:123-128.
10. Кинг, К.К., М.Дж. Риддл. 2001. Влияние металлических загрязнителей на развитие обыкновенного антарктического морского ежа Sterechinus neumayeri и сравнение чувствительности с тропическими и умеренными эхиноидами. Marine Ecology Progress Series 215:143-154.
11. Lam, M.H., A.Y. Tjia, C. Chan, W. Chan, W. Lee. 1997. Исследование видового состава хрома, меди и никеля в прибрежных эстуарных отложениях, загрязненных бытовыми и промышленными стоками. Бюллетень по загрязнению морской среды 34:949-959.
12. Lee, R.F., Kristen O’Malley, Yugi Oshima. 1996. Воздействие токсикантов на развивающиеся ооциты и эмбрионы синего краба Callinectest sapidus. Морские экологические исследования 42:125-128.
13. Марино-Бальса, Х.К., Э. Поза, Э. Васкес, Р. Бейрас. 2000. Сравнительная токсичность растворенных металлов для ранних личиночных стадий Palaemon serratus, Maja squinado, Homarus gammarus. Архивы загрязнения окружающей среды и токсикологии 39:345-351.
14. Meyer. J.S. 2002. Полезность терминов “биодоступность” и “биодоступная фракция” для металлов. Морские экологические исследования 53:417-423.
15. Mwanuzi, F., F. De Smedt. 1999. Модель распределения тяжелых металлов при эстуарном перемешивании. Гидрологические процессы 13:789-804.
16. Райхельт-Брушетт, А.Дж. и П.Л. Харрисон. 2000. Влияние меди на успех поселения личинок склерактинового коралла Acropora tennis. Бюллетень загрязнения морской среды 41:385-391.
17. Roux, L.L., S. Le Roux, P. Appriou. 1998. Поведение и видообразование металлических видов Cu, Cd, Mn, Fe во время эстуарного смешивания. Бюллетень по загрязнению морской среды 36:56-64.
18. Rumbold, D.G., S.C. Snedaker. 1997. Оценка биопроб для мониторинга токсичности поверхностного микрослоя в тропических морских водах. Архивы загрязнения окружающей среды и токсикологии 32:135-140.
19. Сеха, Х. 2003. Токсичность микроэлементов: правда или миф. Advanced Aquarist том 2 выпуск 5 май 2003.
20. Шимек, Р.Л. 2003. Токсичность некоторых свежеприготовленных смесей искусственной морской воды. Reefkeeping.com март 2003.
21. Шимек, Р.Л. 2002. Наши аквариумы с коралловыми рифами – наши личные эксперименты по изучению влияния токсичности микроэлементов. Reefkeeping.com август 2002.
22. Вальдовинос, К., М. Зунига. 2002. Тесты острой токсичности меди на песчаном крабе Emerita analoga: Биомонитор загрязнения тяжелыми металлами прибрежной морской воды Чили. Бюллетень загрязнения окружающей среды и токсикологии 69:393-400.
23. Веласкес, И.Б., Г.С. Хасинто, Ф.С. Валера. 2002. Спектр растворенных меди, кадмия и цинка в Манильском заливе, Филиппины. Бюллетень загрязнения морской среды 45:210-217.
24. Wen, L., P. Santschi, G. Gill, C. Paternostro. 1999. Распределение эстуарных следовых металлов в заливе Галвестон. Морская химия 63:185-212.
25. Wong, C.K., J.K.Y. Cheung, K.H. Chu. 1995. Влияние меди на выживание, развитие и рост личинок и особей Metapenaeus ensis. Бюллетень загрязнения морской среды 31:416-419

Source: reefs.com